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  瘧疾仍然是一個主要的公共衛(wèi)生問題?？汞懰幬锬退幮缘目焖賯鞑ナ钳懠哺媾R的一個主要挑戰(zhàn)?；趯嵱玫臋z測方法，及時準確的分子監(jiān)測，是控制和消除瘧疾的關鍵一步。在這項研究中，建立了兩種快速檢測技術：等位基因特異性PCR（AS-PCR）和重組酶輔助擴增（RAA）結合CRISPR/Cas12a，對它們進行了優(yōu)化和評估，以檢測疑似哌喹耐藥性相關的惡性瘧原蟲裂解酶（Pfexo）基因中的單核苷酸多態(tài)性。此外，將硫代磷酸酯和人工錯配引入AS-PCR的等位基因特異性引物；而在RAA-CRISPR/Cas12a檢測中引入了crRNA錯配堿基，因為根據傳統(tǒng)規(guī)則設計的crRNA無法區(qū)分基因型。結果表明，AS-PCR和RAA-CRISPR/Cas12a的檢測限分別為每微升104拷貝和103拷貝。干血斑的檢測閾值為每微升100-150個原蟲，且對其他基因型無交叉反應。AS-PCR的平均成本大約為每次測試1美元，耗時2-3小時；而RAA-CRISPR/Cas12a系統(tǒng)的平均成本大約為每次測試7美元，耗時1小時或更短。因此，考慮到經濟條件以及儀器、設備和試劑的可及性等，我們提供了更多的選項來檢測Pfexo基因中的單核苷酸多態(tài)性，這可以有助于抗瘧藥物耐藥性的分子監(jiān)測。

  本研究受國家衛(wèi)健委寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室開放課題資助（NHCKFKT2023-04）等項目資助，于2024年10月發(fā)表于International Journal for Parasitology: Drugs and Drug Resistance。

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